Resumo: Foi proposto para Hb da serpente semi-aquática Liophis miliaris um processo de transição reversível dímero - tetrâmero dependente da ligação de O₂. Este processo seria parcialmente explicado devido à substituição dos aminoácidos Glu(101) => Val e Glu(43) => Thr, que estão presentes na interface dimérica (α₁β₂). Tais substituições resultariam na perda de dois aminoácidos carregados negativamente na interface dimérica, contribuindo desse modo para a desestabilização do tetrâmero de hemoglobina. Com o objetivo de testarmos se tal processo é válido para a hemoglobina de Helicops modestus, utilizamos as técnicas de tonometria, cromatografia analítica de filtração em gel e espalhamento de raios X a baixo ângulo (SAXS). Os dados das propriedades funcionais de ligação de O₂ mostraram que a hemoglobina de Helicops modestus, tanto na forma stripped como na presença de cloreto, possui alta afinidade por oxigênio e processo cooperativo de ligação de O₂, em toda a faixa de pH analisado. Na presença de ATP, a afinidade por oxigênio diminui acentuadamente entre pH 7,0 e 8,5 e a cooperatividade (n_H) fica entre valores de 2,0 e 2,6. Nas três condições analisadas, observamos a presença de efeito Bohr alcalino, característico de hemoglobinas tetraméricas. Os dados de estresse osmótico sugerem que a desoxi-hemoglobina de Helicops modestus, quando na ausência de ânions, assume um novo estado conformacional, denominado estado T₀, como proposto por Colombo & Seixas, (1999) para a hemoglobina humana. Os resultados obtidos através da constante de associação dímero-tetrâmero, mostraram que a hemoglobina desta serpente apresenta-se como um tetrâmero estável em solução. Os dados de SAXS mostraram que o raio de giro e dimensão máxima determinados para a hemoglobina de Helicops modestus são similares aos encontrados para a hemoglobina humana. Diante dos dados obtidos, concluímos que a hemoglobina de Helicops modestus é um tetrâmero estável em solução e que, portanto, não há provas da existência do mecanismo de dimerização proposto na literatura para a hemoglobina de Liophis miliaris.